檢查待測物對細胞的毒性試驗有體內(nèi)和體外實驗之分。體外試驗是檢查待測物對培養(yǎng)細胞的影響，方法是將一定量待測物作用于體外培養(yǎng)細胞，再通過觀察或測定細胞增殖、存活率、形態(tài)改變、DNA合成及遺傳性狀等變化對細胞的毒性作用。
(一)化學(xué)物質(zhì)的一般毒性檢測
要了解化學(xué)物質(zhì)對培養(yǎng)細胞一般生物學(xué)性狀的毒性作用，首先將不同稀釋度的待測化學(xué)物質(zhì)加至一定數(shù)量的培養(yǎng)細胞中，培養(yǎng)一定時間后，觀察細胞形態(tài)、存活率、增殖情況及DNA合成情況。該方法簡單易行。例如測定DNA抑制劑或RNA抑制劑的作用時。可采用該方法。
(二)培養(yǎng)細胞染色體畸變分析
體外培養(yǎng)的細胞受到化學(xué)致突變物的作用，其染色體可發(fā)生結(jié)構(gòu)或數(shù)目的改變，根據(jù)染色體畸變頻率的高低及畸變類型來判斷待測物的致突變性。方法是在體外培養(yǎng)的哺乳動物細胞(如CHL細胞)中加入不同劑量待測物一定時間后，加入秋水仙素以抑制細胞分裂時紡錘體形成，增加中期分裂象細胞數(shù)，顯微鏡下觀察分析染色體畸變細胞數(shù)及畸變類型。
(三)哺乳動物培養(yǎng)細胞基因突變試驗
哺乳動物培養(yǎng)細胞基因突變試驗是利用嘌呤類似物選擇突變細胞的試驗。其原理是次黃嘌呤鳥嘌呤磷酸核糖基轉(zhuǎn)移酶(HGPRT)是HGPRT位點的表達產(chǎn)物。該酶是細胞內(nèi)嘌呤核苷酸生物合成的補救途徑，如果該酶失活則不引起細胞致死；但當培養(yǎng)基中含有嘌呤類似物(如6一硫基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、8-氮鳥嘌呤)時，該酶能以這些類似物為底物，生成有毒性的核苷一5一單磷酸，此物質(zhì)摻人到DNA中則能引起細胞死亡。但如果細胞HGPRT位點發(fā)生突變時，細胞對這些嘌呤類似物具有抗性，仍能在含有嘌呤類似物的培養(yǎng)基中生長，故利用此試驗?zāi)苓x擇突變細胞。主要方法是將一定數(shù)量哺乳細胞(如V79)接種于培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)24h后，加入一定濃度致突變待測物作用一定時間，再接種含有嘌呤類似物的培養(yǎng)基中培養(yǎng)7天后固定染色，計數(shù)每皿中細胞形成集落，與對照相比，計算出待測物各濃度組的相對集落形成率，算出突變率。
© 2025 上海一研生物科技有限公司版權(quán)所有 
滬ICP備14030958號-14 管理登陸 技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) GoogleSitemap
