型 號
產(chǎn)品時間2024-11-21
所屬分類輔酶Ⅱ系列
報價300
產(chǎn)品名稱：蔗糖磷酸化酶(SP)生化檢測試劑盒
規(guī)格：100管/96樣 50管/48樣
貨號 : EY-01S125
測試方法:微量法 紫外分光光度法
分類：輔酶Ⅱ系列
測定意義SP(EC2.4.1.7)主要存在于微生物和植物中，裂解糖苷鍵，催化糖基轉(zhuǎn)移到果糖、木糖、半乳糖和鼠李糖等，合成相應(yīng)的糖基低聚糖。此外，SP還能催化合成熊果苷，具有的美白效果，在化妝品工業(yè)中具有重要應(yīng)用。測定原理SP能夠以磷酸為受體，催化蔗糖產(chǎn)生1-磷酸糖，在糖磷酸變位酶催化下變位為6-磷酸糖，在6-磷酸糖脫氫酶作用下還原NADP+生成NADPH，導(dǎo)致340nm光吸收值增加。測定340nm吸光度增加速率，即可計算SP活性。自備實驗用品及儀器天平、低溫離心機、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計、1 mL石英比色皿和蒸餾水。
試劑一：液體×1瓶，室溫保存。
試劑二：液體×1瓶，4℃保存。
試劑三：粉劑×2瓶，－20℃保存。臨用前加入22mL試劑二，現(xiàn)配現(xiàn)用。
試劑四：液體×1支，4℃保存。
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。
2、細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104個）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測。
3、血清等液體：直接測定。
（1）按照蛋白濃度計算
活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(Cpr×V樣)÷T
=1608×△÷Cpr
（2）按照樣本質(zhì)量計算
活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/g鮮重) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷(W×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A÷W
（3）按細胞數(shù)量計算
活性單位定義：25℃中每104個細胞每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反總×109)÷(細胞數(shù)量×V樣÷V樣總)÷T
=1608×△A ÷細胞數(shù)量
（4）按液體體積計算
活性單位定義：25℃中每毫升血清每分鐘氧化1nmol NADH 為1個酶活單位。
ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反總×109) ÷V樣÷T
=1608×△A
ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光徑，1 cm；V反總：反應(yīng)體系總體積，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積，100μL=0.1 mL；T：反應(yīng)時間，1min。
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