產品及特點：
1. 產品僅用于科研即開即用，用戶只需要提供伴放線放線桿菌樣品。
2. 根據伴放線放線桿菌保守序列設計的專一性引物，與相關病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量PCR檢測，避免后續污染。
5. 本試劑盒足夠50次20μL反應體系的熒光定量PCR。
產品名稱 | 鳥分枝桿菌類結核亞型PCR檢測試劑盒 |
英文名稱 | Mycobacterium avium subspecies paratuberculosisPCR |
分類 | PCR檢測試劑盒 |
運輸及保存：
鳥分枝桿菌類結核亞型PCR檢測試劑盒低溫運輸，-20℃保存，保存期限一年。
自備試劑
DNA模板、10×ROX（根據機型決定，具體見使用方法）。
使用方法：
一、稀釋PCR陽性對照（以10E2-10E7拷貝/μL這6個10倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原，本產品不提供活體樣品做陽性對照，產品僅用于科研只提供可以直接使用的DNA片段作為陽性對照。
2. 標記6個離心管，分別為7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在7號管中加入5 μL 1×10E8拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩1分鐘，得1×10E7拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在6號管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在5號管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL的陽性對照到5號管中，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到6個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
二、樣品DNA的制備
8. 如果有N個樣品，必須設置N+2個提取，多出的一個是PC（樣品制備陽性對照），一個是NC（樣品制備陰性對照）。可以用10μL上步制備的PCR陽性對照的第4號（濃度為1×10E4 拷貝/μL，10μL相當于1萬拷貝）或第5號（濃度為1×10E5 拷貝/μL，10μL相當于10萬拷貝）再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。如果每次制備需要200μL樣品，則PC和NC的體積也必須是200μL。
9. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數病毒DNA提取試劑盒兼容。
三、設置qPCR反應（20 μL體系，在樣品制備室進行）
10. 如果只做1次重復，則標記N+9個PCR管，其中N+2個用于上步得到的N+2個樣品，1個用于PCR陰性對照，6個用于PCR陽性對照。如果做2-3次重復，則反應設置數量相應增加2或3倍。
11. 在標記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復。樣品管和陰性對照設置完畢后才設置陽性對照，并且陽性對照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲存好后加）：
乙酸鉀/醋酸鉀/Potassium acetateAR，92%500克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，127-08-2RT
草酸氫鉀/乙二酸氫鉀/重草酸鉀/酸性草酸鉀/乙二酸單鉀鹽/Potassium hydrogen oxalateCP，98%500克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，127-95-7RT
酒石酸氫鉀/重酒石酸鉀/酸性酒石酸鉀/酒石酸鉀/2,3-二羥基-(R-(R*,R*))-丁二酸單鉀鹽/L(+)-酒石酸氫鉀/L-酒石酸鹽氫鉀/L-酒石酸氫鉀/Potassium hydrogen tartrateAR，99.5%500克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，868-14-4RT
檸檬酸鉀/枸櫞酸鉀/檸檬酸三鉀/2-羥基-1,2,3-丙三羧酸三鉀鹽/Potassium citrate monohydrateAR，99.5%500克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，CAS：6100-05-6RT
甲酸鉀/蟻酸鉀/Potassium formateAR，99%500克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，590-29-4RT
油酸鉀/十八碳烯酸鉀/(Z)-9-十八烯酸鉀鹽/十八烯酸鉀/Potassium oleateCP250克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，143-18-0RT
草酸鉀/乙二酸鉀/草酸二鉀一水合物/Potassium oxalate monohydrateAR，99.8%500克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，6487-48-5RT
硬脂酸鉀/十八酸鉀/Potassium stearateCP，98%250克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，593-29-3RT
四草酸鉀/四乙二酸鉀/草酸三氫鉀/二草酸三氫鉀/三氫二草酸鉀二水合物/Potassium tetraoxalate dihydrateCP，99.5%250克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，6100-20-5RT
草酸鈦鉀/乙二酸鈦鉀/雙草酸氧化鈦(IV)酸鉀二水合物/Potassium titanyl oxalate dihydrateAR，98.5%100克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，14402-67-6RT
四苯硼鉀/四苯硼化鉀/四苯基硼酸鉀/Potassium tetraphenylborateCP，98%10克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，3244-41-5RT
亞碲酸鉀/碲(IV)酸鉀/亞蒂酸鉀/Potassium telluriteCP，98%25克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，7790-58-1RT
丁二酮肟/二甲基乙酰肟/丁二酮二肟/二乙二肟/丁二肟/雙乙酮肟/鎳試劑/二乙酰二肟/二甲基乙二醛肟/二甲基乙二肟/2,3-丁二酮二肟/DimethylglyoximeAR，98%25克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，95-45-4RT
二乙酰一肟/2,3-丁二酮一肟/聯乙酰一肟/雙乙酰一肟/甲基肟乙基甲酮/丁二酮單肟/2,3-丁二酮肟/2,3-丁烷二酮一肟/肟乙基甲酮/丁二酮一肟/二甲基乙二酰一肟/Diacetyl monoximeAR10克，Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌，57-71-6RT
鳥分枝桿菌類結核亞型PCR檢測試劑盒2-Chloro-6-fluorobenzyl chloride 質量規格：HPLC≥98%，標準品
Helicid 質量規格：HPLC≥97%，標準品
1-(5-Bromo-2-methoxy-phenyl)adamantane 質量規格：HPLC≥98%，標準品
POLYETHYLENE GLYCOL MONOOLEYL ETHER 質量規格：HPLC≥98%，標準品
3-Bromo-2-chlorothiophene 質量規格：HPLC≥98%，標準品
BASF PALAMOLL 646 質量規格：色價E(1%)=150;紅花黃色素含量>95%
Chondroitin sulfate 質量規格：HPLC≥98%，標準品
Methyl 2-(methylamino)benzoate 質量規格：≥98%，BR
技術特點：
1產品僅用于科研準確可靠，臨床雙盲對照試驗＞1000例，結果與金標準測序法比對，結果*性大于99%。
2高靈敏：可檢測低至10ng的人基因組DNA。
3快速：整個檢測流程只需3小時。
4簡便：試劑盒提供預混好的試劑，使體系配置操作簡便。
5防污染
6高特異性：雙重特異性組成，保證檢測結果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結合必需*配對，才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產物配對，在延伸中產生熒光。
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