型 號(hào)
產(chǎn)品時(shí)間2024-11-22
所屬分類(lèi)氧化與抗氧化系列
報(bào)價(jià)300
商品屬性：
產(chǎn)品名稱(chēng)：類(lèi)黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶(UFGT）生化檢測(cè)試劑盒
規(guī)格：100管/96樣 50管/48樣
貨號(hào) : EY-01S184
測(cè)試方法:微量法 紫外分光光度法
分類(lèi)：氧化與抗氧化系列
商品詳情：
測(cè)定意義：
花色苷是一類(lèi)易溶于極性溶劑的天然色素，屬黃酮類(lèi)化合物。花色苷廣泛存在于植物的根、莖、葉、花和果實(shí)中，使其呈現(xiàn)由紅到紫等不同顏色，是植物主要的呈色物質(zhì)。
類(lèi)黃酮糖基轉(zhuǎn)移酶（UDP-glycose flavonoid glycosyltransferase, UFGT）是花色苷合成過(guò)程的最后一個(gè)酶，可以把不穩(wěn)定的花色素催化成花色苷，在一定范圍內(nèi)，UFGT活性與花色素苷的合成呈現(xiàn)正相關(guān)。
測(cè)定原理：
UFGT催化UDPG與槲皮素生成UDP；UDP在丙酮酸激酶與乳酸脫氫酶作用下，氧化NADH為NAD+，NAD+生成速度與UDP含量成正比，通過(guò)340nm吸光度下降速度反映UFGT活性。
需自備的儀器和用品：
酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔酶標(biāo)板、研缽、冰和蒸餾水。
粗酶液提取：
1、組織：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱(chēng)取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測(cè)。
2、細(xì)菌、真菌：按照細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：試劑一體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬(wàn)細(xì)胞加入1mL試劑一），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率300w，超聲3秒，間隔7秒，總時(shí)間3min）；16000g， 4℃離心20min，取上清液置冰上待測(cè)。
3、血清等液體：直接測(cè)定。
ADH測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑三在25℃水浴中保溫30 min。
3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL樣本上清液、800μL試劑三和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A1和A2。△A測(cè)定管=A1-A2。
測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、將試劑二在37℃（哺乳動(dòng)物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。
3、操作表：
試劑名稱(chēng)（μL） | 測(cè)定孔 |
樣本 | 20 |
試劑二 | 760 |
試劑三 | 10 |
試劑四 | 10 |
將上述試劑按順序加入1 mL石英比色皿中，混勻后立即在340 nm波長(zhǎng)下記錄初始吸光度A1和反應(yīng)1min后的吸光度A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
注意：若A1-A2大于0.5，需將樣本用提取液稀釋?zhuān)笰1-A2小于0.5，可提高檢測(cè)靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
NAD-MDH活力單位的計(jì)算：
1、血清（漿）NAD-MDH活力的計(jì)算
單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/mL）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷V樣÷T=6430×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NAD-MDH活力的計(jì)算:
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位的定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（W× V樣÷V樣總）÷T =6430×ΔA÷W
（3）按細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算：
單位的定義：每1萬(wàn)個(gè)細(xì)菌或細(xì)胞每分鐘消耗1 nmol的NADH定義為一個(gè)酶活力單位。
NAD-MDH（nmol/min/104 cell）=[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷（2000×V樣÷V樣總）÷T=3.215×ΔA
V反總：反應(yīng)體系總體積，8×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.02mL；V樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；W：樣本質(zhì)量，g；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；2000：細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù)，2000萬(wàn)。
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