商品屬性：
產品名稱 | F-actin染色試劑盒（綠色熒光） | 英文名稱 | F-actin Staining Kit (Green Fluorescence) |
規格 | 50 T/300 T/1000 T | 貨號 | EY-01X8560 |
運輸條件 | 藍冰運輸 | 用途 | 僅供科研研究實驗 |
背景：
鬼筆環肽（phalloidin），是從一種劇毒磨菇(Amanita phalloides)中分離出來的一種多肽物質，屬于毒傘肽類毒素，是一種強烈毒素。它是一種特異性結合F-肌動蛋白的雙環肽，因此，使用熒光染料偶聯的鬼筆環肽可以非常方便地研究F-actins的分布。在鬼筆環肽內部，半胱和色之間存在不尋常的硫醚橋，可形成內環結構。當pH升高時，硫醚被裂解，鬼筆環肽喪失對肌動蛋白的親和力。
標記：
1.將細胞培養基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養基。
2.提前將2×EdU標記培養基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合，獲得1×EdU溶液。
【注】：①不建議替換全部培養基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養基建議現用現配，用量以沒過細胞為宜。
3.孵育細胞2 h，棄培養基。
【注】：①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。
4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。
【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。
實驗步驟：
1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養箱中在 37℃ 下培養細胞 24 小時。
2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。
3. 在培養箱中將培養板培養適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。
4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。
5. 將平板在培養箱中孵育 1-4 小時。
6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。
7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。
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