原代細胞的分離培養：
原代培養即直接從有機體取下細胞、組織或器官，讓它們在體外維持與生長。原代培養的特點是細胞或組織剛離開機體，它們的生物性狀尚未發生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內的狀態，表現出來源組織或細胞的特性， 因此用于藥物實驗，尤其是藥物對細胞活動、結構、代謝、有無毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養法有組織塊培養法和消化培養法。
（一）組織塊培養法
許多實驗室喜歡用組織塊培養法進行原代培養，因為方法簡單，細胞也較容易生長。尤其是培養心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養皿或培養瓶后， 即可進行傳代。
1. 設備材料
培養箱、冰箱、超凈工作臺／無菌間、無菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養瓶、培養皿、消化液、基礎培養液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。
2. 操作步驟
（1） 在無菌條件下，取待培養的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。
（2）用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊。
（3）再用Hanks 溶液反復漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養液。
（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養皿內表面，吸去多余的培養液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養皿蓋，做好標記， 置37°C 的CO2培養箱內。
（6） 2~4h 后，于超凈工作臺中，緩緩地向培養皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養液少量，以使組織塊浸沒在培養液中。
（7）輕輕地將培養皿及組織塊移至CO2 培養箱， 如無特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈。
（9） 一般說來，若培養液無明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細胞長滿整個培養皿內表面，即可進行傳代培養。
人肝Kupffer細胞
細胞基本屬性：
產品名稱 | 人肝Kupffer細胞 | 組織來源 | 肝組織 |
種屬 | 人 | 生長特性 | 貼壁生長 |
形態特征 | 星形，多角形細胞 | 英文名稱 | Human Kupffer cells |
貨號 | EY-XY3309 | 規格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 |
質量檢測：巨噬細胞標志物（F4/80）免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等
產品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
培養基：人肝Kupffer細胞專用培養基
培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
換液頻率：每2-3天換液一次
消化液：0.25%
產品貨期現貨，1周左右
運輸方式T25培養瓶/ 順豐快遞（包郵）
供應限制僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用
背景介紹：
肝非實質細胞主要包括肝竇狀內皮細胞、淋巴細胞、Kupffer細胞和肝星狀細胞。肝Kupffer細胞指位于肝竇內表面的吞噬細胞，位于肝血竇腔內，具有變形運動和活躍的吞噬功能，還具有處理和傳遞抗原、調節機體免疫應答等作用，能夠清除血液中的外來抗原、抗原－抗體復合物和細胞碎片等物質。肝Kupffer細胞是全身單核-吞噬細胞系統的重要組成部分, 也是肝臟防御系統主要成員, 在全身和肝臟疾病發生發展中起到重要作用.在肝受到刺激而激活時，細胞因子生成增加，Kupffer細胞也有合成膠原的功能。 |
公司正在出售的產品：
核苷酸腺苷轉移酶1抗體
細胞合成酶總活性熒光定量檢測試劑盒20次
CLIAKitforCOX-2(Humancyclooxygenase-2)ELISAKit人環加氧酶2規格：48T/96T
Ratconnectivetissuegrowthfactor,CTGFELISAKit大鼠結締組織生長因子(CTGF)ELISA試劑盒規格：96T/48T
大鼠補體成分3(C3)ELISA試劑盒 ，英文名： C3 ELISA Kit
Human alpha galactosyl aibody (Gal) ELISA Kit 人α半乳糖基抗體(Gal)ELISA試劑盒
humansinglesandedDNAAibody,ssDNAELISA試劑盒人抗單鏈DNA抗體/變性DNA抗體(ssDNA)ELISA試劑盒規格：96T/48T
ELISAKitCyclin-D2小鼠細胞周期素D2規格：48T/96T
Humancaenorhabditiselegansdeathgene,CED-3ELISAKit人美麗線蟲凋亡基因(CED-3)ELISA試劑盒規格：96T/48T
人型纖溶酶原激活物(uPA)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
小鼠D(VD)免疫試劑盒 Mouse Vitamin D,VD ELISA Kit
過氧化物酶(GPX)測試盒 GR法 50管/48樣
Ratneuophilactivatingprotein-2,NAP-2ELISA試劑盒大鼠中性粒細胞趨化蛋白2(NAP-2/CXCL7)ELISA試劑盒規格：96T/48T
HumanhighsensitivityC-ReactiveProtein,hs-CRPELISA試劑盒人超敏C反應蛋白(hs-CRP)ELISA試劑盒規格：96T/48T
Humanmacrophageinflammatoryprotein2,MIP-2ELISAKit人巨噬細胞炎性蛋白2(MIP-2)ELISA試劑盒規格：96T/48T
大鼠血管性血友病因子(vWF)ELISA試劑盒 ，英文名： vWF ELISA Kit
腫瘤抑制因子FBW7抗體
過敏毒素C3/補體C3抗體
乳腺癌易感基因2抗體
NADH復合體1抗體
線粒體核糖體蛋白L49抗體
半8相關蛋白2抗體
磷酸化β-肌動蛋白抗體
人肝Kupffer細胞c-Myc tag標簽抗體
操作方法：
組織塊直接培養法（原代細胞培養實驗）
材料與儀器
【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數量的未分化的間質細胞，成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個；3、50ml離心筒2個4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個6、細胞計數板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺；
步驟
1) 胚胎的分離。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉移至一個小的無菌培養皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無菌狀態下，將絞碎的胚胎轉移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動。4)在溫暖的環境中或置于37°C培養箱中輕輕搖動15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細胞的液體轉移至一無菌50ml的離心管中，該管內按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復步驟4和5。7)離心混合的細胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復洗滌細胞直至上清清亮為止。
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