原代細胞的分離培養：
原代培養即直接從有機體取下細胞、組織或器官，讓它們在體外維持與生長。原代培養的特點是細胞或組織剛離開機體，它們的生物性狀尚未發生很大的改變，在一定程度上可反映它們在體內的狀態，表現出來源組織或細胞的特性， 因此用于藥物實驗，尤其是藥物對細胞活動、結構、代謝、有無毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養法有組織塊培養法和消化培養法。
（一）組織塊培養法
許多實驗室喜歡用組織塊培養法進行原代培養，因為方法簡單，細胞也較容易生長。尤其是培養心肌，有時還可觀察到心肌組織塊搏動。細胞從組織塊邊緣向外長出并鋪滿培養皿或培養瓶后， 即可進行傳代。
1. 設備材料
培養箱、冰箱、超凈工作臺／無菌間、無菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養瓶、培養皿、消化液、基礎培養液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。
2. 操作步驟
（1） 在無菌條件下，取待培養的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。
（2）用眼科剪將組織塊反復剪成0.5~ 1mm3的小塊。
（3）再用Hanks 溶液反復漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。
（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養液。
（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養皿內表面，吸去多余的培養液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養皿蓋，做好標記， 置37°C 的CO2培養箱內。
（6） 2~4h 后，于超凈工作臺中，緩緩地向培養皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養液少量，以使組織塊浸沒在培養液中。
（7）輕輕地將培養皿及組織塊移至CO2 培養箱， 如無特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細胞從組織塊邊緣長出，形成生長暈。
（9） 一般說來，若培養液無明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細胞長滿整個培養皿內表面，即可進行傳代培養。
兔肺動脈內皮細胞
細胞基本屬性：
產品名稱 | 兔肺動脈內皮細胞 | 組織來源 | 肺動脈 |
種屬 | 兔 | 生長特性 | 貼壁生長 |
形態特征 | 內皮細胞樣 | 英文名稱 | Pulmonary Artery Endothelial Cells |
貨號 | EY-XY3815 | 規格 | 5x105cells/T25或1mL凍存管 |
質量檢測：血管假性血友病因子（vWF）免疫熒光染色為陽性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等
產品規格：5x105cells/T25或1mL凍存管
培養基：兔肺動脈內皮細胞培養基
培養條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃
換液頻率：每2-3天換液一次
消化液：0.25%
產品貨期現貨，1周左右
運輸方式T25培養瓶/ 順豐快遞（包郵）
供應限制僅限于科學研究，絕不可作為動物或人類疾病的治療產品使用
背景介紹：
肺動脈血管內皮細胞是一種多功能細胞，尤其在肺的非呼吸功能方面更具特殊意義。當其受損，肺血管通透性升高導致肺水腫，在成年人呼吸窘迫綜合癥發生機制中具有重要意義。但是處于體內多因素共同作用的復雜環境中，對肺血管內皮細胞的功能和代謝以及病變發生機制很難作深入研究。原代肺動脈內皮細胞的體外培養系統有助于在特定的體外條件下研究肺血管內皮細胞的功能。 |
公司正在出售的產品：
鋅指蛋白777抗體
體液單胺氧化酶A型（MAO－A）活性化學發光法定量檢測試劑盒
（包括標記探針）
通用型HHV6（HUMAN HERPESVIRUS 6）病毒定性檢測試劑盒
石蠟切片組織TNF ALPHA蛋白表達NBT顯色光學顯微鏡檢測試劑盒
非蛋白/游離巰基含量比色法定量檢測試劑盒
冰凍切片半-4（CASPASE-4）活性原位熒光染色檢測試劑盒
細胞MUSK激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）
酵母細胞周期S后期同步（SYNCHRONY）處理試劑盒
（TOLUIDINE BLUE）原位染色試劑盒
組織短鏈羥脂酰脫氫酶（HYDROXYACYL COA DEHYDROGENASE）活性比色法定量檢測試劑盒
細胞銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒
細胞色素P450亞酶51（羊毛甾醇1，4α去甲基化酶）活性
細胞鈣鈉交換體（NCX）蛋白表達熒光定量檢測試劑盒
冰凍切片基質金屬2（MMP2）原位明膠酶譜法（in situ zymography）熒光染色試劑盒
胚胎干細胞內皮細胞（endothelial）定向分化試劑盒
載脂蛋白O抗體
鈣營養蛋白1/鈣結合蛋白8抗體
驅動蛋白家族成員15抗體
JAK和微管相互作用蛋白2/JAK和微管相互作用蛋白2抗體
細胞分裂周期相關蛋白JPO2抗體
X射線修復交叉互補蛋白3抗體
跨膜蛋白59樣蛋白抗體
兔肺動脈內皮細胞APC標記人CD94單克隆抗體
操作方法：
組織塊直接培養法（原代細胞培養實驗）
材料與儀器
【動物】選擇大約一半足孕時間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數量的未分化的間質細胞，成纖維細胞可從這些細胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個【實驗材料】每組的超凈臺中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個；3、50ml離心筒2個4、滅菌培養皿1個，細胞培養瓶1個5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個6、細胞計數板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺；
步驟
1) 胚胎的分離。適用哺乳動物(倉鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個胚胎轉移至一個小的無菌培養皿中，用新的無菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無菌狀態下，將絞碎的胚胎轉移于一50ml的無菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無菌,用攪拌棒輕輕攪動。4)在溫暖的環境中或置于37°C培養箱中輕輕搖動15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細胞的液體轉移至一無菌50ml的離心管中，該管內按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來的50ml離心筒中，重復步驟4和5。7)離心混合的細胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無菌PBS重懸沉淀的細胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復洗滌細胞直至上清清亮為止。
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