原代細(xì)胞的分離培養(yǎng)：

原代培養(yǎng)即直接從有機(jī)體取下細(xì)胞、組織或器官，讓它們?cè)隗w外維持與生長(zhǎng)。原代培養(yǎng)的特點(diǎn)是細(xì)胞或組織剛離開(kāi)機(jī)體，它們的生物性狀尚未發(fā)生很大的改變，在一定程度上可反映它們?cè)隗w內(nèi)的狀態(tài)，表現(xiàn)出來(lái)源組織或細(xì)胞的特性， 因此用于藥物實(shí)驗(yàn)，尤其是藥物對(duì)細(xì)胞活動(dòng)、結(jié)構(gòu)、代謝、有無(wú)毒性或殺傷作用等，是的工具。常用的原代培養(yǎng)法有組織塊培養(yǎng)法和消化培養(yǎng)法。

（一）組織塊培養(yǎng)法

許多實(shí)驗(yàn)室喜歡用組織塊培養(yǎng)法進(jìn)行原代培養(yǎng)，因?yàn)榉椒ê?jiǎn)單，細(xì)胞也較容易生長(zhǎng)。尤其是培養(yǎng)心肌，有時(shí)還可觀察到心肌組織塊搏動(dòng)。細(xì)胞從組織塊邊緣向外長(zhǎng)出并鋪滿(mǎn)培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶后， 即可進(jìn)行傳代。

1. 設(shè)備材料

培養(yǎng)箱、冰箱、超凈工作臺(tái)／無(wú)菌間、無(wú)菌吸管、離心管、酒精燈、試管架、培養(yǎng)瓶、培養(yǎng)皿、消化液、基礎(chǔ)培養(yǎng)液、胎牛血清、Hanks 溶液、雙抗試液、剪刀、攝子、小燒杯。

2. 操作步驟

（1） 在無(wú)菌條件下，取待培養(yǎng)的組織適量，置入小燒杯中， 以適量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉組織塊表面的血污。

（2）用眼科剪將組織塊反復(fù)剪成0.5~ 1mm3的小塊。

（3）再用Hanks 溶液反復(fù)漂洗， 直至液體不混濁為止。等組織塊下沉，將燒杯傾斜，用小吸管盡量吸除Hanks 溶液。

（4）用含20%滅活血清及雙抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培養(yǎng)液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培養(yǎng)液。

（5）用彎頭吸管吸取組織小塊，均勻地置于培養(yǎng)皿內(nèi)表面，吸去多余的培養(yǎng)液，各組織小塊之間相距0.5cm 為宜。蓋好培養(yǎng)皿蓋，做好標(biāo)記， 置37°C 的CO2培養(yǎng)箱內(nèi)。

（6） 2~4h 后，于超凈工作臺(tái)中，緩緩地向培養(yǎng)皿中加入上述含20％血清及雙抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培養(yǎng)液少量，以使組織塊浸沒(méi)在培養(yǎng)液中。

（7）輕輕地將培養(yǎng)皿及組織塊移至CO2 培養(yǎng)箱， 如無(wú)特殊情況，不必觀察。1~2 周后，可觀察到細(xì)胞從組織塊邊緣長(zhǎng)出，形成生長(zhǎng)暈。

（9） 一般說(shuō)來(lái)，若培養(yǎng)液無(wú)明顯改變， 1 周換液1 次即可。待細(xì)胞長(zhǎng)滿(mǎn)整個(gè)培養(yǎng)皿內(nèi)表面，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

質(zhì)量檢測(cè)：血小板-內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子（PECAM-1/CD31）或血管假性血友病因子（vWF）免疫熒光染色為陽(yáng)性，純度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等

產(chǎn)品規(guī)格：5x105cells/T25或1mL凍存管

培養(yǎng)基：豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基

培養(yǎng)條件：氣相：95%空氣+5%二氧化碳；溫度：37℃

換液頻率：每2-3天換液一次

消化液：0.25%

產(chǎn)品貨期現(xiàn)貨，1周左右

運(yùn)輸方式T25培養(yǎng)瓶/ 順豐快遞（包郵）

供應(yīng)限制僅限于科學(xué)研究，絕不可作為動(dòng)物或人類(lèi)疾病的治療產(chǎn)品使用

背景介紹：

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠E選擇素(SELE)ELISA試劑盒 ，英文名： SELE ELISA Kit

人肌酸激酶(CK)ELISA檢測(cè)試劑盒HumanCreatineKinase,CKELISAKit 96T/48T

大鼠合成酶(GLUL)免疫試劑盒 Rat Glamine syhetase,GLUL ELISA kit

CLIAKitforVIP(MouseVasoactiveIestinalPeptide)ELISAKit小鼠血管活性腸肽規(guī)格：48T/96T

毛發(fā)砷元素比色法定量檢測(cè)試劑盒20次

ELISAKiVAg人輪狀病毒抗原規(guī)格：48T/96T

小鼠纖連蛋白(FN)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝

Rat osteoprotegerin ligand (OPGL) ELISA Kit 大鼠骨保護(hù)素配體(OPGL)ELISA試劑盒

Humandopaminedecarboxylase,DDCELISAKit 人多巴胺脫羧酶(DDC)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

ChickenHeatShockProtein60,HSP-60ELISA試劑盒雞熱休克蛋白60(Hsp-60)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

載玻片細(xì)胞CDK2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次

MouseHeatShockProteinglycoprotein96,HSPgp96ELISAKit小鼠熱休克蛋白糖蛋白96(HSPgp96)ELISA試劑盒規(guī)格：96T/48T

豬主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞小鼠血管緊張素Ⅱ   英文名稱(chēng)：   Angiotensin Ⅱ   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   ANGⅡ

小鼠血管生成素-2   英文名稱(chēng)：   Angiopoietin-2   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   ANG 2

小鼠心素   英文名稱(chēng)：   aialnaiureticpeptide   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   ANP

小鼠凋亡誘導(dǎo)因子   英文名稱(chēng)：   apoptosis-inducing factor   規(guī)格：   48T/96T   英文縮寫(xiě)：   AIF

操作方法：

組織塊直接培養(yǎng)法（原代細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)）

材料與儀器

【動(dòng)物】選擇大約一半足孕時(shí)間的胚胎，10－13天齡胚胎含有最大數(shù)量的未分化的間質(zhì)細(xì)胞，成纖維細(xì)胞可從這些細(xì)胞衍生獲得。每組小鼠胚胎1個(gè)【實(shí)驗(yàn)材料】每組的超凈臺(tái)中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml滅菌燒杯2個(gè)；3、50ml離心筒2個(gè)4、滅菌培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)5、1ml，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無(wú)菌玻璃攪拌棒1個(gè)6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；8、酒精燈1臺(tái)；

步驟

1) 胚胎的分離。適用哺乳動(dòng)物(倉(cāng)鼠、小鼠和大鼠)2)將1－2個(gè)胚胎轉(zhuǎn)移至一個(gè)小的無(wú)菌培養(yǎng)皿中，用新的無(wú)菌剪刀小心地絞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在無(wú)菌狀態(tài)下，將絞碎的胚胎轉(zhuǎn)移于一50ml的無(wú)菌離心筒中,加入40ml 0.25％的無(wú)菌,用攪拌棒輕輕攪動(dòng)。4)在溫暖的環(huán)境中或置于37°C培養(yǎng)箱中輕輕搖動(dòng)15分鐘。5)讓存留的組織塊在重力作用下慢慢沉降，將含有懸浮細(xì)胞的液體轉(zhuǎn)移至一無(wú)菌50ml的離心管中，該管內(nèi)按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以滅活,。6)加人新鮮溶液(見(jiàn)前述步驟)于含有殘留未消化組織塊的原來(lái)的50ml離心筒中，重復(fù)步驟4和5。7)離心混合的細(xì)胞懸液，1200r/rain，5分鐘，棄上清。8)用新鮮的無(wú)菌PBS重懸沉淀的細(xì)胞，按步驟7再次離心。9)用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞直至上清清亮為止。